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谱康医学 | 单管检测35人份PBMC——大队列样本编码策略
yl7703永利 发布时间：2024-08-09 yl7703永利 来源：yl7703永利公众号 yl7703永利 浏览量：1222



大队列流式样本编码策略

在大队列流式样本研究中，为保证样本间实验操作的一致性，通常会先对每份样本进行barcoding编码，然后将所有样本混合成1管，进行统一的后期抗体染色等实验步骤。同批次对多个样本进行处理，可节约抗体等试剂，节省操作时间和重复性操作成本，减少因人工操作和机器状态带来的单个样本差异性，极大的提高实验结果的可靠性和准确性。

本次实验采用活细胞barcoding编码方案，用Cd（111Cd、112Cd、116Cd）和Pt（194Pt、195Pt、196Pt、198Pt）标记的CD45作为编码抗体试剂，从7种同位素中任选3种，以金属组合编码的方式标记不同细胞样本，将样本编码上限拓展到了35人份。相比于市面上的20-plex Pd Barcoding编码需要先对细胞进行固定破膜，使用活细胞barcoding编码可以避免部分抗体在固定破膜后特异性不好、染色效果不佳的缺陷。

本实验使用谱康医学 MSFLO 质谱流式细胞仪分析检测 35 人份混合编码的外周血样本免疫细胞。MSFLO 质谱流式细胞仪是先进的悬液单细胞蛋白检测平台，具备高灵敏、高通量、多靶标的单细胞蛋白组学检测能力，以及溶液、单细胞、单颗粒等多种工作模式，其强大的算法可实现多种单细胞编码方式的解码功能。

此外，该编码方式具备一定的可拓展性，以Cd（7种金属同位素）和Pt （4种金属同位素）标记的CD45为例，采用11选3方案，最多可进行165人份样本同批次处理与单管上样，为临床大样本队列和高通量药物筛选研究做准备。



应用方案
仪器配置
MSFLO 台式质谱流式细胞仪

实验设计
（1）Barcoding 设计


 （2）主要试剂


结果分析

通过算法对混合样本进行解码，可有效鉴别35种编码方式对应的35个样本文件，热图和tSNE也能进一步证实35个样本之间区分明显，分离效果优秀。

（1）文件解码


（2）可视化分析

  • 35个样本CD45 histogram

  • 35个样本CD45 heatmap

  • 35个样本tSNE分布

（3）对解码后35个样本进行CD4/CD8 T cells、B cells、Monocytes和NK cells分群圈门，各细胞亚群分群效果较好，亚群比例统计结果如下：


解码后的35个样本以CD4/CD8 T细胞为例的分群效果：


谱康医学 MSFLO 质谱流式细胞仪致力于为生命科学领域提供强大的单细胞、多靶标检测技术手段，满足单细胞 40 色及以上检测指标需求，且通道间基本无串扰、无需调节补偿，背景信号低，工作模式丰富，为不同科学研究领域提供强有力的技术解决方案。

yl7703永利生命科学板块旗下杭州谱康医学科技有限公司，成立于2020年，以流式细胞检测技术为核心，提供专业化的硬件及配套试剂，同时为客户开发开展定制化服务。公司坚持流式细胞仪产业化协同发展战略，拥有高学历流式设备专业研发团队，标准化的GMP生产车间，丰富的实验室建设经验，成熟的实验室管理体系，已经全面掌握流式核心的设备制造技术及设备集成的开发能力，旨在为客户提供整套细胞解决方案。



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